产品及特点
本产品是根据探针法荧光定量PCR原理研发的检测试剂盒，具备以下特点：

1. 即开即用

用户只需提供样品DNA模板，简化了操作流程。

2. 高灵敏度

引物及其他组分经过优化，灵敏度显著提升。

3. 阳性对照

提供阳性对照，便于有效识别假阴性样品。

4. 高特异性

引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域，确保不会与其他生物样本DNA发生交叉反应。

5. 多功能检测

本产品既可用于定性检测，也支持定量检测，线性范围可达至少5个数量级。

6. 反应次数丰富

本产品可支持50次20μL探针法荧光定量PCR反应。

7. 科研专用

本产品仅限科研用途。

实验步骤

一、DNA提取（样本制备区）

用户可使用自选的DNA提取方法对样品进行纯化，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

（由于阳性对照浓度较高，请在独立区域内进行以下稀释操作，以避免污染样品及本试剂盒的其他组成部分。）

1. 标记6个离心管，编号为7，6，5，4，3，2。
2. 在每个管中加入45μL DEPC-H2O（建议使用带芯枪头进行操作）。
3. 将5μL的1×10E8拷贝/μL阳性对照添加至7号管，充分混匀，即得1×10E7拷贝/μL标准曲线样品，置于冰上待用。
4. 更换枪头，将5μL的1×10E7拷贝/μL阳性对照添加至6号管，充分混匀，得1×10E6拷贝/μL标准曲线样品，置于冰上待用。
5. 重复以上操作直至获取6个不同稀释度的标准曲线样品，如不需要制作标准曲线，可直接将阳性对照稀释至1×10E5拷贝/μL。

三、试剂配制（试剂准备区）

若有N个待检样品，准备N+2个qPCR管（包括N个待检样品、1个阴性对照及6个阳性对照），按照说明书向各PCR管中添加相应的成分。

四、添加模板（模板添加区）

向qPCR管中分别加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板及婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒，立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管置于PCR扩增仪器的样品槽中，按下述程序进行扩增（详见说明书）。

六、结果分析

1. 如果制作了标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴绘制标准曲线。通过待测样品的Ct值从标准曲线上推算出DNA浓度的log值。

2. 如果未制作标准曲线，可依据以下标准评估结果：阳性对照的Ct值应<30，有明显的指数增长并呈经典的S型曲线；阴性对照的Ct值应为38或无Ct值，未出现指数增长期与平台期；样本检测结果中，若Ct值<35且有明显指数增长，说明样本中存在婴儿利什曼虫，结果为阳性；若Ct值在35-38范围内，需进行复检，重复实验如仍在该范围且有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

运输及保存

本产品应低温运输，储存于-20℃，有效期为一年。阳性对照需单独存放，避免污染其他试剂。

尊龙凯时始终致力于提供高品质的生物医学产品，确保用户的科研需求得到满足。