细胞冻存是一项重要技术，通过低温条件延缓细胞的生命活动，确保细胞在需要时能够被复苏并应用于各类实验。19世纪末，科学家们开始研究低温对生物组织产生的影响，早期实验表明单纯的冷冻方法可能会导致细胞内部冰晶的形成及渗透压的失衡，从而导致细胞死亡。1937年，Luyet和Hodapp提出了“冰晶损伤”理论，为后续的冷冻保护研究奠定了基础。

1949年，英国科学家在研究精子冷冻时偶然发现，甘油能够显著提高冷冻后精子的存活率。作为一种渗透性冷冻保护剂（CPA），甘油可以进入细胞内，降低冰点，减少冰晶生成，从而通过平衡细胞内外的渗透压防止细胞在冷冻过程中因脱水而破裂。1959年，科学家发现二甲基亚砜（DMSO）同样具备出色的冷冻保护效果，尤其适用于哺乳动物细胞，因为它比甘油更易穿透细胞膜且其毒性低，迅速成为细胞冻存的标准保护剂之一。

在1963年，Peter Mazur提出了冷冻损伤的“两因素假说”，指出在快速冷冻时，细胞内形成的冰晶会损害细胞膜及细胞器，而慢速冷冻时细胞外冰晶的形成则导致细胞脱水，进一步提升胞内溶质的浓度，从而造成化学毒性。这个理论为程序化慢冻法提供了科学依据。

在实验中，大多数细胞的冻存过程中遵循“慢速冻存”的原则，通过程序降温装置控制降温速率（通常为1°C/min），使细胞在冷冻时逐步脱水，避免内部结冰，这样显著提高了冻存细胞的存活率。目前研究显示，5%-10%的DMSO最为适合细胞冻存，具体比例依据细胞类型进行调整。对DMSO敏感的细胞则需减少其浓度。根据经验，8%的DMSO适合大部分细胞系。此外，还需根据细胞培养的难度调整血清比例，难以培养的细胞需要较多血清。对于特别脆弱的细胞，可使用血清与DMSO共同冻存，而不添加培养基。

我们常用的冻存液配方为92% FBS + 8% DMSO（推荐给新手）或92% 完全培养基 + 8% DMSO（推荐给高手）。尊龙凯时提供的特级胎牛血清呈浅黄色、清澈无溶血，经过严密检测，确保无菌、无支原体和相关牛源病毒，低内毒素（<3EU/mL），且不含外源激素、生长因子和抗生素等，测试结果表明其适用于肿瘤细胞、原代细胞及大部分干细胞的培养。

此外，尊龙凯时的非程序性细胞冻存液（无血清）是一种无需经历程序降温步骤的冻结液，可以直接将重悬细胞置入超低温冰箱，免去逐步降温或使用程序化冻存盒的步骤，极大地简化了细胞冻存过程，并减少了血清对细胞及实验的可能影响。

无论采用哪种冻存液，我们建议进行冻检后再进行大规模冻存：即在冻存24小时后复苏一支细胞以确认其状态正常，方能进行批量冻存。冻检成功前应至少保留一瓶细胞培养，以避免复苏失败导致细胞绝种。

武汉尚恩生物技术有限公司（SUNNCELL）位于武汉东湖高新区光谷生物城，专注于细胞及相关产品的研发、生产与服务。公司拥有标准化的GMP实验室与动物房，并已通过GB/T19001-2016/ISO9001:2015质量管理体系认证，持有多项高新技术企业荣誉。主要研发和生产各种细胞系、原代细胞、胎牛血清，以及基础和完全培养基等，提供一站式细胞及培养配套产品采购服务。同时，尚恩生物储存700余种细胞系，并不断通过引进新的细胞丰富种类。我们还提供人源及小鼠源细胞系的STR鉴定、以及其他细胞相关实验服务。尊龙凯时致力于提供优质细胞资源库和相关试剂，为国内各大高校、生物实验室及制药公司等科研单位提供支持，始终追求卓越的产品品质，为科研工作者提供高品质服务！