一、细胞培养条件

细胞名称：人结肠腺癌细胞LS1034

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：首次建议采用1:2比例进行传代，传代情况每两天更换培养液。

备注：请用无菌离心管收集培养基，以便进行对比。如果对比效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞处理与培养

收到细胞后，在详细培养至良好状态后，请灌满完全培养液并封好瓶口，以确保运输细胞的最佳状态。收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净工作台内严格遵循无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，加以处理。随后，通过显微镜观察细胞生长情况，并拍照保存不同倍数的细胞照片（建议40x、100x和200x各一张），前三天的照片为重要售后依据，未提供照片视为收到状态良好。

在传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自制的完全培养基，以便进行对比培养，并在换液后松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请将瓶内培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基在37℃、5% CO2的孵箱中培养。如果细胞密度超过80%，请按照以下步骤进行传代：

弃去培养上清液，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，待细胞观察到大部分变圆并脱落后，迅速轻轻敲击培养瓶，加入5ml以上完全培养基以终止消化。
轻轻吹打细胞以确保完全脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。
将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新完全培养基至每瓶5-8ml，最终放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基以终止消化。随后轻轻吹打细胞以使之脱落，转移悬液至15ml离心管，1000 RPM离心5分钟。
弃去上清，加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管中。
将冻存的细胞直接放入-80℃冰箱，如果后期需要转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（建议佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶。随后用75%酒精消毒冻存管外壁。
将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
弃去上清，将沉淀用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
第二天更换为新鲜的完全培养基以继续培养。

四、注意事项

有些细胞的贴壁性较差，运输过程中可能会掉落，这是正常现象。若脱落的细胞较多，请将培养瓶内液体收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清以进行过渡培养。沉淀后加入胰酶1-2ml，轻轻吹打后重悬，消化1-2分钟，随后加入5ml完全培养基终止反应。再离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），并补充新的完全培养基至5-8ml，每瓶放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题的情况下，哪些情况可以重发？判定标准如下：

运输途中遇到细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等问题，可予重发。
细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实的实验结果，通过核实后给予重发。
常温发货的细胞在静置24小时后的状态，干冰运输的细胞复苏后24小时内如大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发。
干冰运输细胞复苏后24小时或常温运输细胞静置4小时且未开封时出现污染，则可重发。
细胞活性问题，需要在收到产品的7天内提供真实实验结果，通过台盼蓝染色法鉴定细胞活力，并在核实后予以重发。
在收到细胞的当天及第2、3天请拍照，未在3天内告知的问题将视为产品合格。4-7天内出现问题要提供收到细胞前三天的照片以及问题发生时的照片和相关操作步骤，并与技术人员沟通，技术人员将会评估责任，如果由我方责任则重发。

2）以下情况不予重发：

客户自身造成的细胞污染。
客户不正确的操作导致细胞状态不佳。
非本库推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不良。
细胞状态不良，未提供细胞培养前三天照片。
在细胞培养时经过其他处理的情况。
收到细胞后两天内未告知的情况。
视具体情况而定。