3T3-L1细胞诱导分化实验方案

3T3-L1细胞是一种源自小鼠胚胎成纤维细胞的细胞系，以其高效的前脂肪细胞向脂肪样细胞的分化能力而受到广泛关注。该细胞系最早于1974年由尊龙凯时研究团队（Green和Kehinde等人）分离。由于其在体外的类脂肪细胞分化能力，3T3-L1细胞成为研究脂肪细胞发育、代谢、以及与肥胖和糖尿病等代谢疾病相关机制的重要工具。

诱导分化检测

诱导效果的检测方式多样，其中油红O染色法是经典方法之一，它可直观评估脂肪细胞中脂滴的积累程度。油红O是一种脂溶性染料，能够特异性结合细胞内的中性脂质，形成红色脂滴。在显微镜下观察到脂滴数量和大小的增加，即表明诱导分化成功。此外，可通过检测脂肪细胞特异性基因或蛋白质的表达（如PPARγ、aP2等）来判断诱导效果，分子标志物的检测也为评估细胞分化程度提供了便捷手段。

实验步骤

第1阶段：细胞培养

1. 将3×10³个细胞以每平方厘米的密度接种于六孔板中。建议使用早代次的细胞，以确保分化效果，并确保铺板均匀，避免分化不均。
2. 在DMEM培养基中培养细胞直至达到70%的汇合度，每2-3天更换一次培养基。常用的DMEM高糖培养基中应添加10%小牛血清或胎牛血清，以促进细胞生长。
3. 当细胞汇合度达到约90%时，可以进行分化诱导。注意：若汇合度超过70%，将增加分化后细胞的死亡风险。

第2阶段：诱导培养基配制

1. 在无菌条件下制备MDI诱导培养基（包含IBMX、地塞米松和胰岛素）。根据实验需要新鲜制备，储备溶液需在DMSO中配置，并根据说明书复溶胰岛素。
2. 配置100mL的MDI诱导分化培养基。

第3阶段：3T3-L1细胞向脂肪样细胞的分化

1. 从培养箱取出细胞培养板，去除DMEM培养基，向每孔添加2-3mL MDI诱导培养基（标记为第0天）。注意轻柔操作，减少对细胞的冲击。
2. 第3天，更换为2-3mL胰岛素培养基。
3. 第6天，去除胰岛素培养基并添加新鲜的DMEM。
4. 一般而言，在第7-10天可获得完全分化的脂肪样细胞。分化效果可通过油红O染色法检测，以观察脂质的积累情况或通过脂细胞标志物的表达评估分化效果。

尊龙凯时的科研设备和试剂，为细胞分化研究提供了强有力的支持，助力科学家探索脂肪细胞的复杂机制。如需了解更多产品详情，请访问尊龙凯时官网。