一、细胞培养条件

细胞名称：人骨肉瘤细胞HOS
生长特性：贴壁生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：MEM + 10% FBS + 1% NEAA + 1% P/S
传代方法：首次推荐1:2传代
传代情况：2天更换培养液
备注：使用无菌离心管收集培养基，为过渡对比培养作准备。如果对比培养效果不佳，建议直接使用尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收货处理

收到细胞后，应在良好状态下注满完全培养液并妥善封口，这是运输细胞的最佳方式。收到细胞时，使用75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后在超净工作台上进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态，再进行后续处理。使用显微镜观察细胞的生长情况，并保留不同倍数的拍照记录（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片将作为重要的售后依据，未提供照片将视为收到细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未超过80%的汇合度，需将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，在37℃、5% CO2孵箱中培养。如果细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞消化情况。若大部分细胞变圆脱落，迅速取回操作台，轻轻敲击培养瓶后加入5ml以上完全培养基终止消化。
轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，再将悬液转移至15ml离心管中，在1000rpm条件下离心5分钟，弃去上清液并加入1-2ml完全培养基重悬。
按1:2比例将细胞悬液分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。
添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使其脱落，再将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
弃去上清，加入1ml的尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如需转入液氮罐中，请在-80℃冰箱中存放24小时以上，再进行转移。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），立即放入37℃水浴中解冻，直到冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁。
将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
弃去上清，重悬细胞于5ml完全培养基中，并接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞在贴壁时可能不够牢固，运输过程中会有细胞脱落现象，这是正常现象。如脱落严重，可将培养瓶内所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟，收集上清进行过渡培养（后期可为对比培养）。随后添加胰酶1-2ml轻轻吹打、重悬，消化1-2分钟后，加入5ml完全培养基终止反应。再进行离心，弃去上清，补充1-2ml完全培养基重悬。之后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最终放入37℃、5% CO2细胞培养箱中进行培养。

五、售后条款

1）细胞问题可重发的情况及判定标准

运输过程中如遇细胞丢失、瓶身破损、培养液泄漏等问题，可以重发。
一旦发现细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验数据，经过核实后可重发。
若常温发货的细胞静置24小时后、干冰发货细胞复苏后24小时内大部分细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），也可重发。
对于干冰发货的细胞，若复苏后24小时内或常温发货的细胞静置4小时后且未开封出现污染，符合条件可重发。
如有细胞活性问题，请在7天内提供真实实验数据，并通过台盼蓝染色法检测细胞活力，经过核实后可重发。
收到细胞当天及接下来的2、3天请拍照记录，若3天内未告知，则视为产品合格。4-7天内若出现问题，需要提供收到细胞前三天的照片及出现问题时的照片，以及相关操作的详细步骤，并与技术人员沟通，若技术人员认定为我方责任，将予以重发。

2）细胞问题不予重发的情况

因客户原因造成的细胞污染，不予重发。
因不当操作造成的细胞状态不良，不予重发。
使用非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳，不予重发。
若细胞状态不良且未提供细胞培养前三天的照片，不予重发。
若细胞在培养时经过其他处理，不予重发。
在收到细胞后2天内未告知问题，不予重发。
具体情况另行决定。

选择尊龙凯时，为您提供高品质的细胞培养解决方案！