### 人小胶质细胞HMC3培养说明书

#### 一、细胞培养条件

细胞名称：人小胶质细胞HMC3

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：第一次建议以1:2的比例传代

传代情况：每2天更换培养基

备注：请使用无菌离心管收集培养基，以便于过渡对比培养。若对比效果不佳，建议直接购买[尊龙凯时]的完全培养基。

#### 二、细胞收到后的处理

在细胞达到良好状态后，加入完全培养液并封好瓶口是最佳的运输方式。收到细胞后，使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，并在超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后进行处理。通过显微镜观察细胞生长情况，并保存不同倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的图片将作为重要的售后依据，缺省情况下视为状态良好。传代后建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，并在换液后轻松拧松瓶盖。

#### 三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：在细胞未达到80%汇合度时，收集瓶中培养液到离心管中，保留5ml培养基，放入37℃、5% CO2孵箱中培养；当细胞密度超过80%时，进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1-2ml至培养瓶中，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若大部分细胞变圆并脱落，快速取回，轻敲培养瓶后加入超过5ml的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使之完全脱落后吸出，将悬液转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按照1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中。

b. 细胞冻存：

1. 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，并用PBS洗涤一次；
2. 添加0.25%胰蛋白酶约1ml，观察细胞回缩变圆后，添加5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管中，进行1000rpm离心5分钟；
3. 弃去上清液，沉淀细胞并加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。
4. 直接将冻存管放入-80℃冰箱，若后续转入液氮罐，需先在-80℃冰箱中保存24小时以上。

c. 细胞复苏：

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速放入37℃水浴中解冻，待无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁；
2. 将冻存管中的细胞移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中，进行1000rpm离心5分钟；
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养；
4. 第二天更换新鲜的完全培养基继续培养。

#### 四、注意事项

细胞在运输过程中容易出现脱落现象，这属于正常现象。如有较多脱落，请收集全部培养液至离心管中，离心后可做过渡培养。随后，加入胰蛋白酶，轻轻吹打，重悬后消化1-2分钟，加入完全培养基终止反应。再进行离心、重悬，再按照1:2的比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中进行培养。

#### 五、售后条款

1）细胞出现问题可重发的情况：

1. 若运输中出现细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液，均可重发；
2. 细胞污染问题，须在收到产品48小时内提供真实的实验结果，经核实后重发；
3. 常温发货细胞静置24小时后或干冰冻存发货的细胞复苏24小时后，大部分细胞未存活（需提供清晰的细胞状态照片），可重发；
4. 干冰发货细胞复苏24小时后或常温发货的细胞静置4小时未开封而出现污染，应当重发；
5. 细胞活性问题，需在收到产品7天内提供真实实验结果，如通过台盼蓝染色法检测细胞活力，核实后可重发；
6. 收到细胞当天及第2、3天请拍照，若3天内未告知，视为产品合格。4-7天内如有问题，请提供收到细胞前三天的照片及出现问题时的照片及相关操作步骤，经过技术人员确认责任后即可重发。

2）细胞出现问题不予重发的情况：

1. 客户造成的细胞污染情况，不重发；
2. 客户因操作不当使细胞状态恶化，不重发；
3. 由于非本库推荐的培养体系导致细胞状态不良，不重发；
4. 细胞状态不佳且未提供前3天的培养照片，无法重发；
5. 其他处理的细胞，不能重发；
6. 收到后2天内未通知的，不重发；
7. 视具体情况而定。

通过以上步骤及注意事项，确保为您提供卓越的细胞培养体验，选择[尊龙凯时]，为您的研究保驾护航。